First report of
Calpodes ethlius
(Lepidoptera: Hesperiidae)
287
ABSTRACT
T is work provides information on molecular identif cation, biology, and ecology of the moth
Tit ya synoecura
(Dyar,
1914) (Lepidoptera: Lasiocampidae) and aggregates of its larvae are recorded carrying out herbivory on
Banara guianensis
Aublet 1775 (Plantae: Salicaceae). Also, this species of moth is recorded for the f rst time in Panama. Information is
provided on the behavior of the larvae in their nest, and information on their distribution in the region is updated.
Key words
:
Banara guianensis
–
Herbivory
– Hymenoptera – Lasiocampidae –
Titya synoecura
.
RESUMEN
En el presente trabajo se aporta información sobre la identif cación molecular, biología y ecología de la mariposa nocturna
Titya synoecura
(Dyar, 1914) (Lepidoptera: Lasiocampidae) y se registran agregados de sus larvas efectuando herbivoría
en
Banara guianensis
Aublet 1775 (Plantae: Salicaceae). También, se registra por primera vez para Panamá esta especie
de polilla. Se aporta información de la conducta de las larvas en su nido de seda, y se actualiza información sobre su
distribución en la región.
Palabras clave
:
Banara guianensis – Herbivoría
– Hymenoptera – Lasiocampidae –
Titya synoecura
.
ISSN Versión impresa: 1992-2159; ISSN Versión electrónica: 2519-5697
Biotempo, 2024, 21(2), jul-dec: 287-292.
RESEARCH NOTE / NOTA CIENTÍFICA
MOLECULAR IDENTIFICATION, BIOLOGY AND ECOLOGY OF
TITYA
SYNOECURA
(DYAR, 1914) (LEPIDOPTERA: LASIOCAMPIDAE) IN PANAMA
IDENTIFICACIÓN MOLECULAR, BIOLOGÍA Y ECOLOGÍA DE
TITYA
SYNOECURA
(DYAR, 1914) (LEPIDOPTERA: LASIOCAMPIDAE) EN PANAMÁ
Alonso Santos-Murgas
1,2*
& Luis A. Jaen
3
Biotempo (Lima)
doi:10.31381/biotempo.v21i2.6857
https://revistas.urp.edu.pe/index.php/Biotempo
Este artículo es publicado por la revista Biotempo de la Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Ricardo Palma, Lima, Perú. Este es un artículo de acceso
abierto, distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Atribución 4.0 Internacional (CC BY 4.0) [https:// creativecommons.org/licenses/
by/4.0/deed.es] que permite el uso, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original sea debidamente citada de su fuente original.
Facultad de Ciencias Biológicas de la
Universidad Ricardo Palma
(FCB-URP)
Revista Biotempo
Volumen 21 (2) Julio-Diciembre 2024
ISSN Versión Impresa: 1992-2159; ISSN Versión Electrónica: 2519-5697
1,2
Universidad de Panamá, Museo de Invertebrados G.B. Fairchild, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y Tecnología,
Departamento de Zoología, Ciudad de Panamá, Panamá. santosmurgasa@gmail.com.
2
Estación Científ ca Coiba (Coiba-AIP), Ciudad del Saber, Panamá, Panamá.
3
Universidad de Panamá, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y Tecnología, Departamento de Genética y Biología
Molecular, Ciudad de Panamá, Panamá. luisangeljaen@gmail.com
*Corresponding author: santosmurgasa@gmail.com
Alonso Santos-Murgas:
https://orcid.org/0000-0001-9339-486X
Luis A. Jaen:
https://orcid.org/0000-0002-9374-8741
Revista Biotempo: ISSN Versión Impresa: 1992-2159; ISSN Versión electrónica: 2519-5697
Santos-Murgas & Jaen
288
INTRODUCCIÓN
Los lasiocámpidos son polillas de la familia Lasiocampidae;
son lepidópteros ditrisios, conocidas como “eggars”,
“orugas de tienda”, “polillas hociqueras o polillas lappet”,
con más de 2.000 especies y posiblemente con muchas
especies sin describir. Son de distribución cosmopolita.
Las larvas están cubiertas de vellosidad, especialmente en
la parte lateral de su cuerpo. En muchas especies, las larvas
conforman grandes agregaciones y construyen una red de
hilos de seda en el árbol donde viven como protección.
Los adultos son robustos y de gran tamaño, con alas
anchas. Algunos tienen las piezas bucales reducidas y
algunos de estos no se alimentan cuando son adultos
(Fitzgerald, 1995; García-Barros, 1999).
La mariposa nocturna
Titya synoecura
(Dyar, 1914)
(Lepidoptera: Lasiocampidae), presenta una coloración
beige, y son polillas de tamaño mediano. Los machos
presentan coloración más intensa en las alas que la
hembra y posee abdomen más robusto, esta es una de
las diferencias entre ambos sexos. Presenta muy pocos
registros de recolecta y tampoco se conoce casi nada
sobre las plantas hospederas que se alimentan sus larvas
(https://www.acguanacaste.ac.cr/creditos).
En cuanto a sus enemigos naturales aún no se conocen;
solo se tiene registro que una especie de avispa
Enicospilus
sp. (Hymenoptera: Ichneumonidae), no identifcada a
nivel de especie, que se encontró parasitando larvas de
T.
synoecura
en Costa Rica (https://www.acguanacaste.ac.cr/
creditos).
El presente trabajo tiene como objetivos aportar
información biológica y ecológica de
T. synoecura
para
Panamá.
MATERIALES Y MÉTODOS
Área de estudio y procedimientos de campo
Se realizaron cinco visitas al área boscosa en la comunidad
de Altos del María, en el corregimiento de Sorá, Distrito
de Capira, Panamá. Los meses de muestreo fueron abril,
mayo, junio, julio y agosto del 2023; cada visita al campo
comprendía tres días y dos noches. El sitio se encuentra
ubicados a los 08º 38´ 32,1” Latitud N, 080º 02´ 03,4”
Longitud W, a una altitud entre 487,68 y 1005,8 msnm,
con una topografía entre ondulada y pendientes.
Ecológicamente, la región está ubicada en la zona de vida
bosque húmedo tropical; tiene una precipitación anual
acumulada de 1,500 mm a 1,800 mm; temperatura
promedio anual de 26,8 ºC; humedad relativa promedio
anual de 76,6%; brillo solar anual acumulado de 165,8
h; dirección diurna del viento SE en 2m: 1,4 m/seg y
dirección nocturna del viento NW a 10 m: 2,7 m/
seg. Estos datos fueron suministrados por la Estación
meteorológica ETESA, S. A. 8º 57´6´´ O y 79º 51´ 8´´
W, La Zanguenga, Panamá Oeste, 2024.
En agosto de 2023 se recolectaron en campo, 130 larvas
de Lasiocampidae sobre un árbol de
Bianara guianensis
Aubl. con larvas de
T. synoecura
. Se esperó que iniciaran
el proceso de pupa y posteriormente fueron trasladaron
a una cámara de cría al Laboratorio de Entomología
Sistemática del Museo de Invertebrados, G.B. Fairchild,
Universidad de Panamá (Fig. 1; 2-A, 2-B, 3-A, 3-B). La
investigación fue de naturaleza descriptiva y exploratoria.
Se realizaron observaciones a la vegetación aledaña y se
llevó registro fotográfco de todas las etapas de desarrollo
observadas de los insectos.
El 90% de los especímenes que emergieron de las pupas
fueron liberados en el sitio donde se colectaron; el 10%
fueron debidamente etiquetados con la información de
colecta para su preservación e identifcación y fungieran
como “Voucher”.
La identifcación se realizó en el Laboratorio de
Entomología Sistemática del Museo de Invertebrados G.
B. Fairchild, Universidad de Panamá; consultándose la
colección de referencia, además se utilizó la Colección de
referencia del Instituto Smithsonian de Investigaciones
Tropicales, Panamá. Se realizaron comparaciones de
caracteres morfológicos y se revis
ó
la distribución
conocida de
T. synoecura
. Para la identifcación de la
planta
B. guianensis Aubl
(Malpighiales: Salicaceae) se
utilizó a Missouri Botanical Garden (2024).
Para la identifcación de todos los insectos, se utilizó un
estereoscopio Leica M205®. Todo el material biológico
se encuentra depositado en la Colección Nacional de
Referencia del Museo de Invertebrados G. B. Fairchild,
de la Universidad de Panamá (MIUP-UP) con
números de registro: MIUP-DS-0001-2024 al MIUP-
DS-0042-2024.
Molecular identifcation of
Titya synoecura
289
Figura. 1.
Bolsa de seda “casa” de
Titya synoecura
.
Figura 2-A
. Larva de
T. synoecura
recorriendo el árbol de
B.
guianensis
.
Figura 2-B.
Larva de
T. synoecura
saliendo de la “casa”.
Figura 3-A
. Rama con hojas de
B. guianensis.
Figura 3-B
. Larvas de
T. synoecura
herborizando en horas de la noche.
Extracción, amplifcación y secuenciación del ADN
El ADN genómico de las muestras se obtuvo del tórax
del insecto utilizando un kit NucleoSpin DNA Insect
(Macherey-Nagel), siguiendo las indicaciones del
fabricante.
Para la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR),
como marcador molecular se utilizó el gen que codifca
la proteína mitocondrial citocromo oxidasa I (COI).
Los cebadores necesarios para la amplifcación por PCR
se obtuvieron de (Folmer
et al.
, 1994; Simons
et al.
,
1994) para gen COI. Las reacciones de PCR se llevaron
a cabo siguiendo el protocolo de (Murphy
et al.
, 2007)
en volúmenes de reacción de 50 μL utilizando el kit
GoTaq® Green Master Mix de Promega. Los productos
amplifcados se analizaron en una electroforesis en gel de
agarosa al 1,2%.
Los productos de PCR obtenidos fueron secuenciados
con el kit BigDye Terminator v3.1 (Applied Biosystems),
siguiendo las indicaciones del fabricante. En la reacción
de secuenciación se emplearon 5 picomoles del conjunto
de cebadores mencionados y se añadieron 40 ng del
producto amplifcado. Posteriormente, se realizó la
electroforesis capilar de los productos secuenciados,
que fueron analizados con el analizador genético
3500XL (TermoFisher Scientifc, EE.UU). La edición
de los electroferogramas y la identifcación de los
insertos se efectuaron utilizando el software UGENE.
(Okonechnikov
et al.
, 2012). Las secuencias obtenidas se
compararon con secuencias depositadas en el GenBank
del National Center for Biotechnology Information
(NCBI) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov), utilizando
el programa Blastn (Altschul
et al.
, 1990) “basic local
alignment search tool” (BLAST y BOLDSYSTEM
(https://www.boldsystems.org/)para posteriormente
realizar los análisis flogenéticos en el software MEGA
11(Tamura
et al.
, 2021).
Aspectos éticos
Los autores garantizamos que los procedimientos
cumplen la normativa ética exigida en el país.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
De las cinco visitas realizadas al sitio de estudio, en
agosto del 2023 fueron encontradas un grupo de
aproximadamente 48 larvas de
T. synoecura
que son muy
difíciles de encontrar y observar, debido a que en esta
especie sus larvas construyen una estructura a base de
seda, con una sola abertura de entrada y salida, bastaste
compacta en forma de bolsa, adherida a una rama y a
una altura de 10 m sobre el suelo, y durante el día se
introducen y permanecen dentro en de esa “casa”. Durante
el día pueden salir a defecar y vuelven a salir nuevamente
al caer la noche a alimentarse del mismo árbol donde se
encuentran; en este caso las larvas se encuentran en un
árbol de
B. guianensis
(Figs. 1, 2-A, 2-B, 3-A, 3-B). Esta
especie de planta alcanza un tamaño considerable de 2-15
m. Este árbol es muy común en bosques semicaducifolios,
zonas norcentral y atlántica; a una altitud de 30–1000
msnm desde Nicaragua hasta Bolivia y Brasil.
Revista Biotempo: ISSN Versión Impresa: 1992-2159; ISSN Versión electrónica: 2519-5697
Santos-Murgas & Jaen
290
El “saco” de seda se dejó en el sitio por ocho días adicionales
hasta que todas puparon en el interior del “saco” de seda.
Las pupas se encuentran envueltas en seda y el capullo
miden aproximadamente 3,2 mm. Posteriormente en el
laboratorio emergieron las 48 mariposas nocturnas,
T.
synoecura
.
En el laboratorio hembras y machos copularon (5 parejas)
y colocaron masas de huevos envueltos en cúmulos de
hilos unidos fuertemente, parecen escamas alargadas
endurecidas, en su interior se encontraban entre dos
a cuatro huevos y eran colocados en las paredes de la
malla donde se encontraban. Posterior a este evento
reproductivo las parejas fueron liberadas al campo (Fig.
4, 5, 6, 7, 8, 9).
Figura. 4.
Titya synoecura
en cópula.
Fig. 5
. Hembra de
T. synoecura
ovipositando en el
laboratorio.
Fig. 6.
Huevos de
T. synoecura
expuestos.
Fig. 7
. Larva de
T. synoecura
sobre “casa”
.
Fi
g. 8
. Tamaño de las pupas de
T. synoecura
.
Fig. 9.
Liberación de
T. synoecura
(macho) en campo.
Es el segundo reporte de esta especie en condiciones
naturales observadas desde larvas hasta adulto. El primer
reporte fue realizado en Costa Rica, Guanacaste, Sector
Pitilla ACG, Estación Biológica Quica, Calma (412
msnm).
Se conf rma el comportamiento de
T. synoecura
que viven
camuf adas en dentro de la casa de seda, durante el día y
salen al caer la noche para herbivorizar las hojas del árbol
B. guianensis.
La secuencia de ADN del marcador COI de
T. synoecura
,
obtenida a partir del producto amplif cado de PCR
usando los cebadores universales para COI (Folmer
et
al.
, 1994; Simons
et al.
, 1994) se identif ca mediante el
código de barras de ADN COI.
La secuencia de ADN de nuestra muestra fue deposita en
la plataforma GenBank del NCBI con numero de acceso
PQ395180, con esta secuencia de ADN del marcador
moleculares gen de la subunidad I de citocromo oxidasa
(COI), se realizó una búsqueda con la herramienta Blastn
(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi), que ayudó a
identif car similitudes y diferencias entre las secuencias.
Para nuestra secuencia del gen COI observamos un nivel
de similitud del 96,16%, con la secuencia GU204030.1
especie
T. synoecura
. depositada en GenBank. Tanto en
En BOLDSYSTEM y GenBank, nuestras secuencias
muestran arriba de un 96% de similitud e identidad con
secuencias de la especie
T. synoecura.
Para el análisis f logenéticose alineo la secuencia obtenida
del marcador COI con secuencias representativas de las
secuencias de referencia del género
Tytia
y secuencias para
posteriormente realizar un árbol f logenético mostrado en
la Fig. 10. Este árbol de consenso bootstrap inferido a
partir de 1000 réplicas se toma para representar la historia
evolutiva de los taxones analizados (Felsenstein, 1985).
Las ramas correspondientes a particiones reproducidas en
menos del 50% de réplicas Bootstrap; junto a las ramas
se muestra el porcentaje de árboles replicados en los que
los taxones asociados se agruparon en la prueba bootstrap
(1000 réplicas) (Felsenstein, 1985).
Las distancias evolutivas se calcularon utilizando el
método de Kimura de 2 parámetros (Kimura, 1980), y
están en unidades del número de sustituciones de bases
por sitio.
La variación de la tasa entre sitios se modeló con una
distribución gamma (parámetro de forma = 1). El árbol
ME se buscó utilizando el algoritmo Close-Neighbor-
Interchange (CNI) (Nei & Kumar, 2000) a un nivel de
búsqueda de 1. El algoritmo Neighbor-joining (Saitou &
Nei, 1987) se utilizó para generar el árbol inicial.
Molecular identifcation of
Titya synoecura
291
Este análisis incluyó 21 secuencias de nucleótidos. Las
posiciones de codones incluidas fueron 1ª+2ª+3ª+No
codifca
nte. Se eliminaron todas las posiciones ambiguas de
cada par de secuencias (opción de eliminac
ión por pares).
En el conjunto de datos fnal había un total de 391
posiciones. Los análisis evolutivos se realizaron en
MEGA11 (Tamura
et al.
, 2021). Nuestra muestra PAN
Titya
se incluye dentro del grupo de especies de
T.
synoecura
con un alto nivel de parentesco lo que corrobora
el análisis taxonómico y comparación de nucleótidos en
la plataforma BOLDSYSTEM y GenBank.
Entre las principales limitaciones que presentamos en este
estudio es la poca información bibliográfca publicada en
varios aspectos, biológicos, ecológicos y taxonómicos. De
igual forma las escasas colectas y observaciones en campo
de la especie. Otras de las limitaciones son las pocas
secuencias alojadas en los bancos de genes (GenBank) de
la región, para poder comparar y tener una aproximación
mas exacta.
Podemos concluir que este trabajo contribuye a llenar un
vacío al conocimiento biológico, ecológico, distribución
geográfca e identifcación molecular de la especie.
Además, contribuimos en alojar la secuencia genética de
la especie al banco de genes (GenBank) para la región;
esto contribuye para que otros investigadores puedan
tener acceso a la información y poder utilizarlas en sus
investigaciones relacionada al tema y al grupo de insecto.
AGRADECIMIENTOS
Todos los autores declaramos que no tenemos conficto de
interés. Agracemos el fnanciamiento de la Universidad de
Panamá y a través del contrato de subsidios económicos
SENACYT DDCCT Nº. 004-2023.
Author contributions: CRediT (Contributor Roles
Taxonomy)
ASM =
Alonso Santos-Murgas
LAJ =
Luis A. Jaen
Conceptualization:
ASM
Data curation:
ASM, LAJ
Formal Analysis:
ASM, LAJ
Funding acquisition:
ASM
Investigation:
ASM
Figura. 10.
Árbol flogenético, obtenido con el método
de máxima verosimilitud, resultado del análisis de
secuencias COI depositadas en el Genbank y nuestra
secuencia (PAN Titya).
Methodology:
ASM, LAJ
Project administration:
ASM
Resources:
ASM, LAJ
Software:
LAJ
Supervision:
ASM
Validation:
ASM
Visualization:
ASM, LAJ
Writing – original draft:
ASM
Writing – review & editing:
ASM, LAJ
Revista Biotempo: ISSN Versión Impresa: 1992-2159; ISSN Versión electrónica: 2519-5697
Santos-Murgas & Jaen
292
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Received August 7, 2024.
Accepted September 30, 2024.