Biotempo 2006, Volumen 6,
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MECANISMOS ENDÓGENOS IMPLICADOS EN LA EMBRIOGÉNESIS
CIGÓTICA Y EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA: GENERALIDADES Y
ULTIMOS DESCUBRIMIENTOS
Antonietta Gutiérrez Rosati1
Sandy Espinoza
Danilo Arias
Víctor Caro
RESUMEN
Haberlandt en 1902 propuso la teoría que todas las células de las plantas pueden llegar a
formar otras plantas, es decir, la totipotencia, pero en ese tiempo no pudo ser demostrado.
White en 1939 informó sobre la inducción de brotes adventicios in vitro de callos en Nicotiana
glauca con N. langsdorfii y Nobercourt obtuvo raíces adventicias de brotes en callo de la
zanahoria, estos experimentos endosaron la teoría de la totipotencia celular.
Más adelante y en forma simultánea, demostraron Reinert y Steward en 1958 sobre la
producción de embriones somáticos, más adelante demostró que estos embriones fueron
originados de las células aisladas, demostrando la totipotencia de las células de la planta. La
regeneración de plantas directamente de explantes o de callos, por medio de la embriogénesis
somática se ha utilizado como alternativa en los métodos de la propagación; sin embargo, ese
uso se ha limitado debido a estabilidad genética limitada en las culturas de callos. Tiene, no
obstante la necesidad regenerar las plantas de selecciones de las células, como también la
necesidad para establecer métodos genéticos celulares aplicables en la mejora de las plantas
y la recuperación de las variantes somaclonales; por lo tanto un interés considerable en
definir las rutas de la regeneración para varias plantas de la importancia económica aún
existe
Palabras Claves: embriogénesis somática, embriogénesis cigotica, regeneración,
variante somaclonal, totipotencia celular.
SUMMARY
In 1902 Haberlandt proposed the theory that all cells of the plants are able to form complete
plants that is to say, that have the totipotency, but in that time it was not demonstrated.
White in 1939 I inform about the induction of in Vitro adventitious buds from calluses in
Nicotiana glauca with N. langsdorfii and Nobercourt obtained adventitious buds roots in carrot
callus, these experiments endorsed the theory of cellular totipotency.
Later and in simultaneous form, Reinert and steward in 1958 informed about the production
of somatic embryos, later was demonstrated that these embryos were originated from isolated
cells, demonstrating the totipotency of plant cells. The regeneration of plants directly from
explantes or from calluses, by means of the somatic embryogenesis has been used as an
alternative in the propagation methods; nevertheless, that application has been limited because
of limited genetic stability in the cultures of calluses. It has, however the necessity to regenerate
plants from cells selections, as also the necessity to establish applicable cellular genetic methods
in the improvement of the plants and the recovery of somaclonales variants; consequently a
considerable interest in defining the routes of regeneration for several plants of economic
importance exists
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1 Universidad Nacional Agraria La Molina, P.O.Box 456 La Molina, Lima 12- Perú.
E-mail: antonietta@lamolina.edu.pe
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Key Words: somatic embryogenesis, cigotic embryogenesis, regeneration, somaclonal
variation, celular totipotency.
INTRODUCCIÓN
En 1902 Haberlandt propuso la teoría que
todas las células de las plantas son capaces
de formar plantas completas es decir que
tienen la totipotencialidad, pero en ese
tiempo no fue demostrado.
White en 1939 informo acerca de la
inducción de yemas adventicias in Vitro a
partir de callos de Nicotiana glauca con
N. langsdorfii y Nobercourt obtuvo raíces
adventicias de un callo de zanahoria estos
experimentos respaldaron la teoría de
totipotencia celular.
Posteriormente y en forma simultánea,
Reinert y steward en 1958 informaron
acerca de la producción de embriones
somáticos, mas tarde se demostró que estos
embriones eran originados a partir de
células aisladas, demostrándose la
totipotencia de las células vegetales.
La regeneración de plantas directamente
de explantes o a partir de callos, por medio
de la embriogénesis somática se ha utilizado
como una alternativa en los métodos de
propagación; sin embargo, esa aplicación
ha sido limitada a causa de la poca
estabilidad genética en los cultivos de
callos. Hay, en cambio la necesidad de
regenerar plantas a partir de células
selectas, como también la necesidad de
establecer métodos genéticos celulares
aplicables en el mejoramiento de las plantas
y en la recuperación de variantes
somaclonales; en consecuencia existe un
considerable interés en definir las vías de
regeneración para varias plantas de
importancia económica.
ASPECTOS TEÓRICOS
GENERALES:
La embriogénesis somática (asexual o
adventicia) consiste en el desarrollo de
embriones a partir de células que no son el
producto de una fusión gametica, en este
proceso se produce una estructura bipolar
con eje radical-apical a partir de una célula
somática.
Este proceso se produce con mucha
asiduidad en la naturaleza, produciéndose
de forma espontánea en más de 60 familias,
algunas tan importantes como las:
crucíferas, gramíneas, rosáceas, legumi-
nosas y palmáceas etc. Es catalogado
como un mecanismo apomíctico.
La efectividad de los tratamientos para la
obtención de la embriogénesis somática
depende de si el tejido del explante esta
formado de CsDPE (células somáticas
determinadas proembriogenicas) o CsNE
(células somáticas no embriogénicas)
términos planteados por Evans et al (1981)
Sharp et al (1983).
En ciertos aspectos los embriones somáticos
mantienen similitud con los embriones
zygóticos; sin embargo, tanto in vivo como
in vitro, puede ocurrir ciertas anorma-
lidades en el desarrollo como por ejemplo
fusión de cotidelones.
En estudios de embriogeneis somática se
sigue utilizando la zanahoria como un
sistema modelo no solo para estudios de
desarrollo, sino también para determinar
eventos bioquímicos que controlan la
morfogénesis.
Tipos De Embriogénesis Somática
Existe principalmente dos tipos de
embriogénesis somática: directa e indirecta.
Embriogénesis directa: un estimulo de
la división celular puede ser suficiente para
la formación de un embrión somático a
partir del tejido del explante (Merkle et al
1995).
Los explantes con este tipo de embrio-
génesis experimentan un mínimo de proli-
feración antes de formar los embriones
somáticos, formándose en explantes en que
todas o algunas de las células están
predeterminadas como células embrio-
génicas, por haber retenido algunas de las
propiedades de las células meristematicas
parentales de las que derivaron (embriones,
semillas).
Embriogénesis indirecta: en este caso
las células no embriogénicas tienen que
llevar a cabo varias divisiones mitóticas ante
la presencia de una auxina durante la
inducción, pasando al estado de las células
embriogénicas y formándose callos.
En este proceso la fase de formación de
callos se interpone entre el explante original
y la aparición de embriones somáticos
(Merkle et al 1995) según Halperin (1995)
este tipo de embriogénesis es característica
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de órganos maduros en que las células tiene
que pasar por varios ciclos celulares para
lograr la embriogénesis a determinadas
condiciones.
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA
Explante: muchos factores influyen en la
conducta del explante estos incluyen el
órgano que esta sirviendo como fuente de
tejido, La edad fisiológica y ontogénica del
órgano, la estación en que el explante es
obtenido, el tamaño del explante y las
cualidades globales de la planta a la cual se
ha obtenido el explante.
Se pueden usar diferentes tipos de
explantes para inducir la formación de
embriones en especies forestales, entre
ellos embriones zygóticos en Taxus
bravifolia y en Araucaria angustifolia
En algarrobo se uso la radícula como
explante, en nuez se uso cotidelones,
hipocotilos y raíces, mientras que en roble
se uso embriones inmaduros y óvulo.
Uno de los problemas de la inducción de la
embriogénesis somática es la alta taza de
fenolización de explantes, la cual es una
reacción natural de la planta al efecto de la
herida debido a los polifenoles y taninos.
Medio de cultivo: se usa generalmente el
medio desarrollado por Murashige et al
(1982) debido a su alta concentración de
sales, otros medios utilizados también son
el medio basal MS- en rosa y WP- en roble.
Se ha demostrado que la exposición a altas
concentraciones de sacarosa y manitol
aumenta el potencial embriogénico en callo
de zanahoria.
El nitrógeno en forma de nitrato y Ion
amonio en concentraciones de 5-12.5 µM
es esencial así como el nitrógeno orgánico
que provisto de glutamina y alanina es
también beneficioso y puede remplazar al
nitrógeno inorgánico en el medio.
El abastecimiento de nitrógeno es
importante en la embriogénesis somática
debido a la continua síntesis de proteína,
ácidos nucleicos y sustancias de reserva.
El carbón activado inhibe el efecto de los
fenoles. La adición de esta sustancia en
cultivos embriogénicos promueve el
desarrollo cuando este ha sido inhibido, ya
que al parecer este adsorbe los compuestos
fenólicos.
Las auxinas y citoquininas inhiben el
desarrollo del embrión, pero permitan la
germinación y la maduración de embriones.
Las poliamidas como la espermita, la
putrescina y la espermidina, esta
relacionada con el control de la
embriogénesis somática en zanahoria,
inhibiendo el desarrollo de los embriones
somáticos.
Reguladores de crecimiento: según
Evans et al (1981) la mayoría de los
sistemas embriogénicos requieren para la
inducción de embriones concentraciones
altas de auxina (generalmente 2,4-D) en el
medio.
Nombra y Kumamine (1995) demostraron
que a pesar que las auxinas son importantes
para la formación de grupos celulares
embriogénicos, su remoción permite el
desarrollo de la embriogénesis somática, la
cual se dá a través de los estadios globular,
corazón, torpedo y cotiledón. El desarrollo
de un sistema embriogénico de alta
frecuencia y sincrónico así como métodos
alternativos para el aislamiento del embrión
ha incrementado nuestro conocimiento de
los eventos moleculares y fisiológicos que
regula los diferentes estadios de la
maduración del embrión.
El rango del uso del 2,4-D es de 0.5-27.6
µM y concentraciones mas altas como
45uM de 2.4-D en caso del que el carbón
activado se incorpore al medio.
También es importante el uso del ANA e
AIA así como también el uso del Picloran
que es un inductor de la embriogénesis
(0.1mg/l), Pliego Alfaro 1988.
Las citoquininas y ácido giberélico es
incorporado al medio con el fin de ayudar a
la maduración y a la germinación de los
embriones somáticos como en el Santalum
album y Citrus sinensis.
El ácido Abcísico se usa como un inhibidor
el cual reprime la embriogénesis somática
y reduce las frecuencias de anormalidades
del desarrollo como son la formación
secundaria de embriones a partir de
embriones somáticos.
Algunos otros aditivos del medio: Se ha
encontrado que AgNO3 a concentraciones
de 10-20 uM incrementa hasta en dos veces
el numero de embriones somáticos en
cultivos de suspensión de Daucus carota
L. Estas concentraciones no afectan el
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crecimiento o sobrevivencia de las células
ni el pH del medio, solo genera un leve
incremento de la producción de etileno. Sin
embargo 1-10 ppm de ethephon, ácido 2-
cloroetilfosfónico (fuente exógena de
etileno) provoca un decaimiento en la
formación de embriones somáticos con
tasas inhibitorias de 15 y 50%
respectivamente. Asimismo, la actividad
de arginina descarboxilasa (ADC), una
enzima clave de la ruta de poliaminas es
estimulada por AgNO3 en los primeros 4
días de embriogénesis somática y reducida
por ethephon. Esto sugiere que AgNO3
estimula la embriogénesis somática
inhibiendo la acción del etileno aunque aún
no es claro su papel en el control de la
actividad de ADC.
La adición de 1-10mM de DFMO
(difluorometilornitina) a un medio de cultivo
permite el normal desarrollo de la
embriogénesis somática aun a
concentraciones inhibitorias de 2,4-D.
DFMO también causa un incremento de la
actividad de la arginina descarboxilasa
(ADC) y de la acumulación de poliaminas
e inhibe la acumulación de etileno en
presencia o ausencia de 2,4-D.
Difluorometilarginina (DFMA) a 0.1-1.0
mM inhibe completamente la embriogénesis
aun en ausencia de 2,4-D; también inhibe
la actividad ADC y causa reducción de los
niveles de poliaminas. Por tanto, la
biosíntesis de etileno inducida por auxina
juega un rol importante en la embriogénesis
ya que la promoción de la biosíntesis de
poliaminas (por DFMO) puede causar una
reducción de la biosíntesis de etileno por
reducción de SAM (s-adenosilmetionina) lo
que permite el desarrollo de la
embriogénesis aun en presencia de auxina.
Condiciones del medio ambiente: los
parámetros físicos influyen en el desarrollo
y crecimiento del embrión.
Altas intensidad lumínica es esencial para
la embriogénesis somática en Nicotiana
tabacum in Vitro, en cambio en zanahoria
fue necesaria la oscuridad para el desarrollo
y la maduración normal de los embriones
somáticos.
Entre otros factores que inducen la
embriogénesis somática se encuentran la
presión osmótica, iones metálicos pesados
y deshidratación los cuales generaron
embriones somáticos en cultivos celulares
de Arabidopsis thaliana como lo
demuestran los trabajos hechos por Mijo
Ikeda-Iwai et al., 2003. Además en estos
trabajos también se a determinado que el
tipo de planta de una misma especie influye
en el desarrollo de embriones en
Arabidopsis. También es importante la
duración del tratamiento a estrés.
Control endógeno de la embriogénesis
somática por mecanismos genéticos:
El desarrollo de la semilla consta
principalmente de dos partes: los procesos
morfológicos tempranos (desarrollo del
embrión) y los eventos de maduración
tardíos (deshidratación de la semilla,
acumulación de reservas, etc)
En los procesos morfológicos tempranos y
luego los tardíos se observa una
diferenciación del embrión en diferentes
tejidos: meristemo apical del tallo,
Hypocotilo, Raíz, Meristemo apical de la
raíz, cotiledones y plúmula. Todo este
proceso de diferenciación que se realiza en
el proceso morfológico temprano y el de
maduración de la semilla han sido
investigados principalmente en
Arabidopsis thaliana.
ALGUNOS ESTUDIOS
REALIZADOS EN LAS
PROTEÍNAS PRESENTES EN LA
EMBRIOGÉNESIS
Proteinas PR: las proteínas PR son
proteínas de defensa contra el stress y
ataque de algunos insectos.
Se han detectado también durante la
formación de algunos órganos: en
germinación, fluoración , senescencia en
plantas sanas (Tahiri-ALout, et al., 1990).
Una de ellas es la proteína P-19 cuyo rol
no se ha especificado durante
embriogénesis, pero que se encuentra
preferentemente en estadíos tempranos,
estadio globular (Chenget al., 1996; Sassa,
Hilano 1998; Capella et al., 1997). En el
estudios de Takuma et al (2004) se
detectaron dos otras proteínas de esta
misma familia: una de 16 y otra de 18.5Kb.
La de 16 se detecto durante toda la
embriogénesis, pero la de 19 y 18.5Kb solo
durante el estadio globular. Como las tres
reaccionaron al mismo antisuero,
concluyeron que su estructura es
semejante. (Takuma et al., 2004)
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Como P-19 es una glicoproteína, la
secuencia de bases corresponde con una
proteína de 16.5Kb, y no de 19.5Kb como
se esperaba (Takuma et al., 2004).
Hay reportes anteriores que hablan de otras
proteínas tipo PR que se expresan durante
la embriogénesis: GEA 20 en plántulas y
semillas, y GEA31 en estadios globulares
hasta el de plántula. 43 proteínas tipo
Thaumatina que tienen alta similitud con las
PR han sido detectadas durante este
período, siendo mas frecuentes en los
estadios tempranos.
Estas proteínas parecen tener relación con
la iniciación de la embriogénesis desde las
células somáticas de zanahoria. De la
misma manera GEA20 y 31 fueron
encontrados por Lin et al. (1996) en los
estadíos tempranos.
Se ha asociado estas proteínas PR con
eventos tempranos secuénciales en la
formación de los Cluster de células
somáticas hasta la diferenciación de
plántulas (Yasuda et al., 2000)
ESTUDIOS EN GENES
RELACIONADOS A LA
EMBRIOGÉNESIS
En A. thaliana se ha encontrado que
existen 4 genes principales que se encargan
de su regulación: ABI3 ( ABSICIC ACID
INSENSITIF3), LEC1 (LEAFY
COTYLEDONS1), LEC2 (LEAFY
COTYLEDONS2), FUS3 (FUSCA 3)
(Giraudat et al., 1992, Gusmaroli et al., 2001,
Lotan et al., 1998, Meinke et al., 1994, Parcy
et al.,1997,Stone et al., 2001, West et al.,
1993). Estos 4 genes codifican para
proteínas que son activadoras
transcripcionales, y que son los principales
reguladores de la embriogénesis.
LEC1, LEC2 y FUS3 son importantes para
ambas fases del desarrollo de la semilla.
En la embriogénesis de los mutantes para
estos tres genes observamos una
intolerancia del embrión a la desecación,
defectos en la síntesis y acumulación de
los materiales de almacenamiento y
tricomas en los cotiledones (estructuras
exclusivas de hojas). Y los mutantes lec1
presentan cotiledones semejantes a hojas (
Meinke et al., 1994, Parcy et al., 1997, West
et al., 1993, West et al.,1994).
La expresión de estos tres genes se da
principalmente en la fase temprana de la
embriogénesis. Si provocamos una
expresión ectópica de LEC1 en células
vegetativas se induce la formación de
estructuras semejantes a las de un embrión
en la superficie de la hoja. Y así mismo, la
expresión de LEC2 induce la expresión de
genes exclusivos del embrión como los que
codifican para la cruciferita A, la proteína
de almacenamiento 2S y la Oleosina (Lotan
et al, 1998, Stone et al., 2001). Sin embargo
no se conoce como estos genes actúan a
nivel molecular en esta planta. Se sabe que
las proteínas LEC1 y FUS3 presentan un
dominio B3 que se encuentra en factores
de transcripción de plantas, como es el caso
de ABI3 y VP1 (Leurben et al., 1998, Stone
et al., 2001) implicados en la maduración
de la semilla y que expresan tardíamente.
Los genes LEC son reguladores centrales
de la embriogénesis somática. Se confirma
esta predicción ya que los genes LEC1 y
FUS3 codifican para Factores de
trascripción que son críticos para la
embriogénesis (Lotan et al, 1998, Luerbern
et al., 1998, Reidt etal., 2000).
LEC1:
La proteína LEC1 es muy semejante a la
subunidad HAP3 del factor de unión a la
caja (CBF) CCAAT que es una regulador
transcripcional en eucariotas (Lotan et al.,
1998). Se sabe poco de estos CBF en
plantas (Albani et al., 1995, Edwards et al.,
1998, Li et al, 1998), pero se ha identificado
genes homólogos a HAP3 en dicho grupo.
En bacterias y vertebrados, solo se ha
identificado 1 gen tipo HAP3, pero en
plantas se han detectado varios: los que son
tipo LEC1 (like-LEC1) y los que no son de
este tipo (non-like-LEC1) (Gusmaroli et al.,
2002, Gusmaroli et al, 2001), lo que sugiere
que existen múltiples homólogos HAP3 en
plantas superiores que regulan la expresión
genética de sets de genes específicos de la
embriogénesis.
Pero es difícil un análisis específico de la
expresión de LEC1 durante la
embriogénesis, ya que esta se dan en áreas
muy específicas y pequeñas dentro de
flores y frutos inmaduros en estadíos
tempranos de desarrollo, y porque no
existen protocolos para el cultivo in Vitro
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de embriones zygóticos en estadíos
tempranos.
En A. thaliana se ha inducido la
embriogénesis somática para dicho
propósito con embriones zygóticos,
protoplastos de células derivadas de hojas
y con explantes de punta de ápice de tallo
(Ikeda et al., 2002, Ikeda et al., 2003, Luo
et L., 1997, Meinke et al, 1994); pero solo
se obtuvo un número limitado de embriones
somáticos y fue muy difícil obtenerlos en el
mismo estadio.
Es por ello que el modelo dominante es el
de zanahoria, ya que desde 1958 en el que
se reporta el primer estudio, muchos
investigadores han desarrollado procesos
experimentales simples y eficientes
(Zimmerman , 1993).
Dicha embriogénesis en zanahoria se logra
en grandes cantidades transfiriendo células
embriónicas de un medio con auxinas a uno
sin dicha hormona; y se logra una
sincronización de estadíos transfiriendo
agregados celulares de un cierto tamaño
(entre 38 y63 µm) a un medio sin auxinas
de manera espaciada (baja concentración
celular).
Así se logra observar los cambios
morfológicos semejantes a los de la
embriogénesis zygótica.
En zanahoria existe un gen similar al de
LEC1 de A thaliana. Utilizando la
biblioteca génica de zanahoria se obtuvieron
algunos genes candidatos con esta función.
Dicho gen LEC1 de zanahoria se denominó
C-LEC1, encontrándose por lo menos dos
copias de este (Yazawa et al., 2004).
Se observó que la secuencia de amino
ácidos de dicha secuencia candidata en
zanahoria era muy semejante a la de LEC1,
observándose que del 56 al 79% de los
Amino ácidos de la región B3 de la
subunidad HAP3 del factor de unión a la
caja CCAAT (Yazawa et al., 2004)..
El gen C-LEC1 se expresa en células
embriogénicas, en embriones somáticos y
en semillas en desarrollo, y dicha expresión
se da en las regiones periféricas del embrión
mas no en el endospermo(Yazawa et al.,
2004).
Esta expresión no se da al azar. se observa
una pico en su expresión a los 7 días de
iniciada la inducción de células
embriogénicas (trasladándolas a una medio
sin auxinas), o a los 23 días después de la
floración, mas no en las células ya
diferenciadas. (Yazawa et al., 2004).
Para comprobar que dicho gen tenia una
actividad semejante a LEC1 de
Arabidopsis, se introdujo dicho gen C-
LEC1 a un mutante lec1 (Arabidopsis), y
se observo que el promotor de LEC1
promovía la trascripción de los genes
estructurales de C-LEC1, traducido por la
corrección de las estructuras anormales del
mutante lec1, lo cual prueba que dichos
gene son homólogos en estas dos especies.
(Yazawa et al., 2004).
LEC2 y FUS3:
LEC 2 es expresado principalmente en la
embriogénesis, y transcribe una proteína
con un dominio B3, lo que sugiere, que la
igual que LEC1 y FUS3 son reguladores
transcripcionales del desarrollo de la
semilla.
El dominio B3 es una secuencia de 120
Amino Ácidos descrita inicialmente el la
tercera región básica de l gen del maíz VP1,
que comparte secuencias con su ortólogo
en Arabidopsis: ABI3 (Giraudat et al., 1992).
Varias otras proteínas de origen vegetal
contienen este dominio B3, tales como
ABI3, VP1, FUS3 y AUXIN RESPONSE
FACTOR1 (Reidt 2000, Mc Carty et al.,
1991, Ulmasov et al., 1997). Hasta donde
se sabe, el dominio B3 es exclusivo en
plantas.
LEC2 FUS3 y ABI3 son expresa dos
principalmente durante el desarrollo de la
semilla, aunque ABI3 opera en la fase de
maduración, mientras que FUS3 y LEC2
en ambas etapas.
Los resultados del estudio de Stone et al.(
2001) sugieren que la expresión del gen
LEC2 es suficientes para establecer un
medio embriónico que provee la formación
de un embrión somático.
Si bien la expresión ectópica de LEC1
también es suficiente para la formación de
una embrión somático, dicha embriogénesis
es mucho mas intensa con LEC2 que con
LEC1 (Stone et al.,2001)
En embriogénesis zigótica los genes LEC1
y LEC2 son expresados de manera
temprana, dándole la competencia para
formar el embrión, pero sus funciones se
traslapan.
LEC1 y LEC2 tiene funciones parecidas
pero no idénticas. sus funciones son
complementarias y parcialmente
redundantes, aunque sus roles exactos no
ha sido caracterizados de manera precisa
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(Lotan et al, 1998, Meinke et al., 1994, West
et al, 1994).
PKL:
En arabidopsis, el mutante pkl genera
embriogénesis en cultivo de raíces
germinadas sin hormonas en el medio (Ogas
et al, 1997). Sin embargo LEC1 se expresa
en las raíces de estos mutantes y no en los
tipos nativos. (Ogas et al, 1999). Estos
resultados sugieren que LEC1 es reprimido
por PKL en la post embriogénesis, dicha
represión no seda en los mutantes pkl. SE
sugiere que LEC2 podría también ser
inhibido por PKL luego de la embriogénesis
de la misma manera que lo hace con LEC1.
La expresión LEC1 y LEC2 son suficientes
para la inducción de la embriogénesis
somática. Ya no renecesita inducir por
hormonas el tejido somático para que se de
la competencia a estas células. Lo que nos
da a entender que los genes LEC1 y LEC2
son factores de trascripción que avivan los
genes responsables de la iniciación de la
embriogénesis somática.
ACCIÓN DE LOS GENES
ANTERIORMENTE VISTOS EN EL
GEN ATGA3OX2:
FUS3 y LEC2 están envueltos en la
regulación de la embriogénesis de plantas
superiores. Según análisis bioquímicos y
moleculares en la biosíntesis de GA es
activada erróneamente en los mutantes lec2
y fus3 con respecto al tipo silvestre(Curaba
et al., 2004).
Ogawa et al (2003) determino que no solo
existía un tipo de GA activo: GA1, sino que
existía otro: GA4 que incluso presenta mas
actividad que GA1 hasta ahora estudiado
durante la germinación.
Se observo también que las proporciones
entre GA1 y GA4 difieren en la
embriogénesis con respecto a la
germinación y los tejidos vegetativos,
presentándose una proporción de 10:1 en
la primera, y de 1:10 en los dos otros estados
(Talon et Al., 1990; Xu et al,. 1999)
Como podemos observar en la figura, GA4
y GA1 siguen diferentes rutas alternas para
la formación de GA. No se conoce aun que
es lo que determina si se va a seguir una u
otra vía, pero los datos de Curaba et al.,
(2004) sugiere que esta activación se da
en algún punto entre el desarrollo tardío de
la semilla y la germinación.
Plant physiol. Vol 136(2004)
Metabolismo predominante de la
formación de GA en A. thaliana
Se observaron niveles elevados de GA1 en
los mutantes lec1-2 mientras que los niveles
de GA4 se elevaron en los mutantes fus3-
8. Como esta dos formas de GA solo
difieren por una 13b-hydroxilación, la
hipótesis mas sencilla para explicar esta
observación es que las 13 b-hydroxilasa es
codificada por un gen desconocido que es
regulado de manera diferente por las vías
de LEC2 y FUS3(Curaba et al., 2004).
Se ve siempre la germinación prematura
como un desajuste temporal en la
germinación. Los datos de Curaba et al.
(2004) nos muestran que esto no es cierto
para los genes biosintéticos de GA. En los
tipos nativos, los genes de la biosíntesis de
GA son expresados, mientras que los
catabólicos de Ga no lo son (Ogawa et al.,
2003). Podemos contrastar estos
resultados con las o la afectación de la
expresión del gen AtGA3ox2 en los
mutantes lec2 y fus3, y observamos también
que AtGA20ox3 desactiva enzimas
responsables del catabolismo de GA
bioactivo (Thomas et al 1999) y que es
fuertemente inducida en semillas mutantes
lec2 y fus3.
Sabemos también que la germinación
prematura de lec1 es independiente de GA
(Raz et al., 2001). Como el metabolismo
de GA esta implicado, esto sugiere que la
germinación prematura y la germinación son
diferentes, y que los genes LEC2 y FUS3
actúan específicamente en los genes
AtGA3ox2 (Curaba et al.,2004)
Se observo un alta interacción sinérgica
entre los genes LEC y los ABI,
especialmente con respecto a la respuesta
a ABA durante la germinación (Baumlein
et a., 1994; Parcy et al., 1994; Meinke et
al., 1994; West et al., 1994; Parcy et al.,
9 - 21
Biotempo 2006, Volumen 6,
16
1997; Namara et al., 2000; Brocard-Gifford
et al., 2003). Este estudio sugiere
fuertemente que este sinergismo es debido
a la disrupción del balance GA/ABA
durante la embriogénesis: siendo el
metabolismo de GA controlado por los
genes LEC y el de ABA por los ABI.
Los genes PICKLE, PKL, fueron
propuestos como componentes del de
activador que modula GA durante el
desarrollo de la germinación que previene
la re-expresión del estado de desarrollo
embriónico. (Ogas et al., 1999; Dean Rider
et al., 2003) así un mutante pkl retiene
características de tejido embriónico en los
meristemos de raíz de una manera muy
incrementada cuando se somete a dicho
embrión a bajas concentraciones de
inhibidores de GAs. Esta expresión de
diferenciación aberrante es compensada
con la incorporación de GA exógeno. (Ogas
et al., 1997). PKL expresa un factor de
remodelación de cromatina necesario para
la represión de LEC1, LEC2 y FUS3 (Ogas
et al., 1997; Dean Rider et al., 2003). Los
estudios de Curaba et al (2004) sugieren
que los niveles menores de GAs con
respecto a los tipos nativos se deben a la
represión incrementada de la biosíntesis de
GA por los genes LEC.
Regulación de la expresión del gen
AtGA3ox2 por FUS3
En fus3-8 y lec1-2 no hay represion de
este gen. La no represion en el mutante
lec2 puede ser consecuencia de una baja
regulación de FUS3 (Kroj et al., 2003).
También podemos suponer que la represion
del gen AtGA3os2 es una acción primaria
del gen FUS3. los datos de Curaba et al.,
(2004) muestran que esta acción es directa
ya que la proteina FUS3 se une
específicamente al elemente RY presente
en el promotor de dicho gen. Pero no
podemos dejar de lado que LEC2 y FUS3
juntos son necesarios para la reprsion de
este gen.En embos casoso este gen
AtGA3ox2 es el primer gen blanco de una
proteina de domino B3 descrito hasta ahora,
aunque se han descrito varios genes que
son luego regulados por los genes ABI y
FUS3 (nambara et al., 2000). Lo que
ointrtriga es que este gen no sea reprimido
en células epidermicas del embrión del
mutante fus3. este gen tampoco se expresa
en la epidermis durante la germina-
ción,perosi en el cortex y el endodermos
(yamagushi et al., 2001). Es posible que
existe algún tipo de regulación tipo cis
durante la embriogénesis y la germinación.
Se ha demostrado recientemente que los
genes FUS3 se expresan específicamente
en la células epidérmicas del embrión donde
reprime la expresión de TTG1 (Tsuchiya
et al., 2004). Además la expresión del gen
FUS3 bajo e control del promotor
específico de la epidermis AtML1 es
suficiente para reprimir el fenotipo del
mutante fus3. (Tsuchiya et al., 2004).
Seria interesante colocar al gen AtGA3ox2
bajo el control del promotor AtML1 para
determinar en cuanto la biosíntesis de GA
participa en el genotipo fus3.
Las rutas metabólicas de LEC2 y FUS3
reprimen la expresión de AtGA3ox2 durante
la embriogénesis.(Curaba et al., 2004)
Por mas que trabajos anteriores hayan
mostrado que GA es importante durante la
embriogénesis (Singh et al., 2002) este
estudio (Curaba et al., 2004) muestra que
las plantas necesitan regular negativamente
la biosíntesis de GA en los embriones.
El afinamiento de la regulación de la
biosintesis de GA parece envolver
mecanismos cruzados entre otras
fitohormonas tales como ABA, etileno o
auxinas que también tienen un rol
importante en la embriogénesis.(curaba et
al., 2004)
Se necesitan mas estudios para entender
el mecanismo molecular exacto utilizado en
este complejo tramado de señales que se
da durante la embriogénesis. (curaba et al.,
2004).
El gen C-ESE1
El gen C-ESE1 (Carrot Early somatic
Embryogenesis 1) en zanahoria es
expresado en la etapa inicial de
embriogénesis somática. C-ESE1 codifica
una proteína con los dominios aglutinina y
S-locus-glicoproteína y su expresión es
específica en células primordiales del
embrión somático. Las células transgénicas
de zanahoria con expresión reducida de C-
ESE1 poseen un amplio espacio intercelular
y un bajo nivel de polisacaridos en la
superficie celular y un desarrollo retardado
de la embriogénesis somática. Se deduce
que este gen es responsable para la
9 - 21
Biotempo 2006, Volumen 6,
17
morfología necesaria durante el desarrollo
embrionico.
El gen TAN
La mutación de tanmei/emb2757 (tan) en
Arabidopsis thaliana causa defectos en
el desarrollo del embrión y de la semilla.
Los embriones mutantes tan al igual que
los mutantes lec (leafy cotyledon) acumulan
antocianina, son intolerantes a la
desecación, forman tricomas en los
cotiledones y poseen una reducida
acumulación de proteínas y lípidos de
reserva. El gen tan funciona en las fases
temprana y tardía del desarrollo embrionario
y actúa en forma conjunta con el gen lec
los cuales se solapan durante la
embriogénesis. El producto del gen tan
tiene 7 motivos WD que se repiten lo que
sugiere que puede interactuar con otras
proteínas como controladores durante el
desarrollo del embrión.
Genes ABI5 y EEL
Estos genes codifican los factores de
transcripción homólogos ABI5 y EEL
funcionan antagónicamente para regular la
expresión génica durante la embriogénesis
tardía.
El desarrollo de una semilla implica dos
fases: en la primera se da la división celular
y la morfogénesis de la planta, en la segunda
fase, llamada maduración, el embrión
acumula sustancias de reserva, adquiere
dormancia y tolerancia a la desecación.
(Wobus and Weber, 1999).
En Arabidopsis existen genes de clase
MAT y de clase LEA. Los primeros
incluyen genes que codifican proteínas de
reserva tales como globulinas 2S y 12S
(Pang et al., 1988; Guerche et al., 1990).
Los de clase LEA, abundantes en la
embriogénesis tardía, codifican proteínas
LEA implicadas en la tolerancia a la
desecación (Hoekstra et al., 2001). Además
la fitohormona ABA se acumula durante la
maduración de la semilla y regula
positivamente la expresión de genes de las
dos clases (Koornneef et al., 1989; Parcy
et al., 1994; Phillips et al., 1997).
Entre los factores de transcripción que
regulan la expresión de genes durante la
maduración se encuentra el gen ABI3
insensible al ABA.
En semillas mutantes abi3, la expresión de
los genes de clase MAT y LEA es reducida
9 - 21
comparada con las de tipo silvestre (Parcy
et al., 1994; Nambara et al., 1995, 2000).
ABI3 no se puede unir por si solo al
promotor de sus genes blanco.
Un ortólogo de ABI3 en el arroz, OsVP1,
interactúa con TRAB1 que es un factor de
transcripción tipo cremallera de leucina
(bZIP) que se une al elemento de respuesta
para ABA (ABRE), CACGTG, que esta
presente en el promotor de los genes LEA
(Hobo et al., 1999).
En Arabisopsis ABI5 cumple un papel
igual al de TRAB1 y permite la regulación
de los genes LEA dependientes de ABI3.
La mutación abi5 produce una reducción
en la sensibilidad a ABA durante la
germinación y decrece la expresión de
algunos genes LEA como AtEm1 y AtEm6
durante la maduración de la semilla
(Finkelstein, 1993, 1994; Gaubier et al.,
1993).
Finkelstein y Nakamura establecieron por
separado que ABI5 posee estructura de
cremallera de leucina (bZIP) y que
interactúa con ABI3. Por tanto, la acción
de ABI3 sobre los ABREs presentes en los
promotores de los genes LEA esta mediada
por las proteínas bZIP.
Los mutantes abi3 son muchos más
perceptibles que las de abi5 ya que según
Delseny et al. , 2001.la acumulación de los
RNAm de genes LEA como AtEm1 y
AtEm6 es nula en abi3 pero solo
parcialmente reducida en abi5. Esto nos
dice que ABI5 contribuye solo en algunos
casos de los diferentes roles que ABI3
cumple durante la maduración de la semilla.
Se ha aislado y caracterizado el factor de
transcripción EEL, que es homologo a ABI5
y posee estructura de cremallera de leucina
(bZIP) pero difieren en ciertas estructuras
que los hacen diferentes.
A diferencia del mutante abi5, los mutantes
eel no inhiben la expresión de los genes de
maduración observados y por el contrario
se acrecentó las concentraciones de los
mRNAs de AtEm1 y de AtEm6 . Estudios
sobre estos comportamientos concluyeron
que ABI5 y EEL compiten por los mismos
lugares de unión con el promotor para
AtEm1.
La expresión de los genes AtEm están
regulados positivamente por ABI5 y
negativamente por EEL.
Esto se deduce de la competencia por
lugares de unión en los cuales el activador
positivo de la transcripción de AtEm1, ABI5,
Biotempo 2006, Volumen 6,
18
9 - 21
esta regulado por el efecto negativo en la
transcripción de AtEm1 por parte de EEL.
Este modelo simple de regulación genética
explicaría por que los mutantes eel generan
un aumento en la concentración de mRNAs
de AtEm1 ya que ABI5 no tiene
competencia por el sitio de regulación para
el promotor de AtEm1. Además de
constatarse que los niveles de EEL
disminuyen en los estados tardíos de el
embrión y disminuyen en las fases
tempranas; caso contrario ocurre con EEL
De este modo, los genes LEA se
encuentran regulados por factores de
transcripción pertenecientes al tipo bZIP y
en este caso específico ABI5 y EEl
cumplen roles antagónicos para la expresión
de estos genes.
El gen Agamous- like 15 (AGL15)
AGL-15 es un factor de trascripción del
dominio MADS y se acumula
preferentemente en tejido de angiosperma
pro- embrionario (meristemas, heridas,
embriones somáticos, apomicticos y otros)
lo que sugiere un rol en esta etapa
importante da la planta su ubicación es
en el núcleo donde cumple un papel de
regulación.
La construcción de semillas transgenicas
que expresan en forma constitutiva el gen
AGL-15, denominados MIKC debido a los
dominios M, I, K y C-terminal, mantuvieron
por periodos prolongados la forma
embrionaria de los embriones secundarios
generados usando semillas MIKC
germinados.
Otros reguladores transcripcionales que
promueven programas embriogeneticos
(LEC1, LEC2, BABY BOOM y
WUSCHEL) son expresados en estas
semillas MIKC. Así BABY BOOM induce
embriones somáticos en cotidelones,
pecíolos de hojas y en meristemo apicales
caulinares (SAM). La expresión de WUS
induce embriones somáticos en las raíces.
Por tanto el rol de AGL15, un factor del
dominio MAS que se acumula durante la
embriogénesis, es mantener el estado
embrionario de las células en las que se
expresan. Muchos de los miembros del
grupo MADS juegan un papel importante
en ele desarrollo, como lo demuestran las
mutaciones de perdida de función que
originan la transformación homeotica de la
identidad del órgano (Riechmann y
Moyerowitz, 1997). AGL15 se acumula en
el núcleo de las células de los embriones
en estadios muy importantes (estado de
ocho células en Arabidopsis y permanecerá
relativas a altos niveles durante la
morfogénesis y dentro del estado de
maduración (Perry et al, 1996)
CONTROL DE LA
EMBRIOGÉNESIS POR
REGULACIÓN DEL
METABOLISMO: ASIMILACIÓN
DE NITRÓGENO.
Las macromoléculas nitrogenadas, tales
como los amino ácidos y las poliamidas
tienen un rol muy importante para el
metabolismo de las células, principalmente
en el proceso de morfogénesis, y
embriogénesis somática donde las
replicaciones celulares y las
diferenciaciones celulares son tan intensas.
Se marco con 15N un medio con células
vegetales en diferentes estadíos de
embriogénesis y con células no
embriogénicas así como embriones
germinantes.
Las células no embriogénicas y los
embriones germinantes mostraron
glutamina y alfa amino ácidos marcados con
dicho nitrógeno, mientras que las moléculas
marcadas en células en embriogénesis
(entre el estadío globular hasta el torpedo)
la L-arginina fue el principal amino ácido
marcado, asi como los alfa amino ácidos.
Así mismo, se marcó un medio con sucrosa
con 14C. Los amino ácidos marcados fueron
glutamina, glutamato arginina y ornitina.
Glutamina y glutamato presentaban una
concentración constante durante la
embriogénesis, mientras que Arginina
aumentaba en concentración desde el
estadío globular hasta el torpedo, y luego
decrecía.
Biotempo 2006, Volumen 6,
19
9 - 21
Esto nos hace pensar que dicho amino ácido
es muy importante en el proceso de
embriogénesis.
Dicho amino ácido proviene del ciclo de la
ornitina o de la urea. Uno de sus puntos de
control mas importantes esta dado a nivel
de la enzima N- acetyl glutamato Kinasa
cuya acción se describe en la siguiente ruta:
(enzima #2)
Esta enzima presenta control tipo feedback,
inhibiéndose por su producto final: arginina.
Esta enzima solo ha sido purificada y
caracterizada en algunos organismos
unicelulares, teniéndose reportes de su
estructura 3D en E. coli. En arveja (Pisum
sativum) ya se ha logrado aislar y
caracterizar; y en arroz hay reportes que
se activa dentro del cloroplasto al unirse
sensible al aumento de nitrógeno PII.
En este reporte (Lohmeier et al., (2005) se
ha estudiado principalmente su actividad
durante la embriogénesis, presentándose un
pico en el estadío de torpedo. Esto nos hace
pensar que la inhibición por producto final
se desactivara en este punto, llegando a una
actividad muy alta, por mas que la
concentración de arginina aumenta también.
En células no embriónicas la actividad de
esta enzima existe pero es muy baja, y en
células proembriónicas es un poco más
elevada.
Podemos llegar a la conclusión, que lo que
inhabilita el retrocontrol de esta enzima por
producto final es el alto requerimiento de
arginina durante este proceso. Al tener una
alta replicación celular, este amino ácido es
utilizado inmediatamente para la síntesis de
proteínas, y no llega a inhibir la NAGK,
siento esta enzima muy importante para los
requerimientos de la célula en compuestos
nitrogenados.
LITERATURA CITADA
A. TAHIRI-ALAOUT, E. Dumas, S.
Gianinazzi (1990) Detection of PR-b
proteins in tobacco roots infected with
Chalara elegans, Plant Mol.Biol. 14
869–871.
BAUMLEIN H, MISERA S, LUERSSEN
H, KOLLE K, HORSTMANN C,
WOBUS U, MULLER AJ (1994) The
FUS3 gene of Arabidopsis thaliana is a
regulator of gene expresiion during late
embriogénesis. Plant J 6: 379-387
BROCARD-GRIFFORD IM, Lynch TJ,
Finkelstein RR (2003) Regulatory
networksin seeds integrating
developmental absicic acid, sugar, and
light signaling. Plant Physiol. 131: 78-
92
CAPELLI N, DIOGON T, Greppin H,
Simon P (1997) Isolation and
characterization of cDNA clone
encoding an osmotin-like protein from
Arabidopsis thaliana.Gene 191: 51-
56
CHEN R, WNAG F, SMITH A.G (1996)
A flower-specific gene encoding an
osmotin-like protein from Lycopersicn
esculentum. Gene 179: 301-302
CURABA J, MORITZ T, Blervaque R,
Parcy F, Raz V, Herzog M, Vachon G
(2004) AtGA3ox2, a key gene
responsible for bioactive Gibberellin
biosynthesis, is regulates during
embriogenesis by LEAFY
COTYLEDON2 and FUSCA3 in
Arabidopsis. Plant physiol 136: 3660-
3669
D. W. MEINKE, L. H. Franzmann, T. C.
Nickle and E. C. Yeung. Leafy
Cotyledon Mutants of Arabidopsis
(1994) The Plant Cell, Vol 6, Issue 8
1049-1064.
ELLEN W. HARDING, Weining Tang, Karl
W. Nichols2, Donna E. Fernandez, and
Sharyn E. Perry (October 2003)
Expression and Maintenance of
Embryogenic Potential Is Enhanced
through Constitutive Expression of
AGAMOUS-Like 15. Plant
Physiology, Vol. 133, pp. 653–663.
DEAN RIDER JR, HENDERSON JT,
Jerome RE, Edenberg HJ, Romero-
severson J, Ogas J (2003) Coordinate
repression of regulators of embriogenic
identity by PIKLE during germination
in Arabidopsis. Plant J 35: 33-43
GIRAUDAT, J., HAUGE, B. M.,
VALON, C., SMALLE, J PARCY,F.
& GOODMAN, H.M. (1992) Plant
cell 4, 1251-1261
H. SASSA, H. HIRANO (1998) Style-
specific and developmentally regulated
accumulation of a glycosylated
thaumatin/PR5-like protein in Japanese
pear (Pyrus serotina Rehd.), Planta
205 ,514–521.
Biotempo 2006, Volumen 6,
20
HUANG W, CUI X, TIAN Y, PENG X
(1994) Cloning of T7 Lysozyme gene
and construction of the vector for
transgenic lants resistant to bacterial
infection.
WEI SHENG WU HSUEH PAO 34: 261-
265
KAZUTOSHI YAMAGISHI, NORIKO
Nagata, Kelly Matsudaira Yee, Siobhan
A. Braybrook, Julie Pelletier, Shozo
Fujioka, Shigeo Yoshida, Robert L.
Fischer, Robert B. Goldberg and John
J. Harada (September 2005) TANMEI/
EMB2757 Encodes a WD Repeat
Protein Required for Embryo
Development in Arabidopsis. Plant
Physiology. Vol. 139, pp. 163-173.
KIMINORI TAKAHATA, MIYUKI
TAKEUCHI, Minoru Fujita, Junichi
Azuma, Hiroshi Kamada and Fumihiko
Sato (2004) Isolation of Putative
Glycoprotein Gene from Early Somatic
Embryo of Carrot and its Possible
Involvement in Somatic Embryo
Development. Plant and Cell
Physiology 45(11):1658-1668.
KROJ T, SAVINO G, VALON C, Giraudat
J, Parcy F (2003) Regulation of storage
protein gene expression in Arabidopsis.
Development 130: 6065-6073
LIN X, HUANG G.J.H, ZIMMERMAN
J.L (1996) Isolation and
characterization of a diverse set of
genes from carrot somatic embryons.
Plant physiol. 112: 1365-1374
LOTAN, T., OHTO, M., MATSUDAIRA
Yee, K., West, M. A. L., Lo, R.,
KWONG, R. W., YAMAGISHI, K.,
FISCHER, R. L., Goldberg, R. B. &
Harada, J. J. (1998) Cell 93, 1195–
1205.
LUERBEN, H., KIRIK, V., HERRMANN,
P. & MISERA, S. (1998) Plant J. 15,
755–764.
LOHMEIER-VOGEL E M,
LOUKANINA N , Ferrar T
S,Moorhead G B.G , Thorpe T.A ,
(2005). N-acetyl glutamate kinase fron
daucus carota suspention cultures:
embriogenyc expression profile,
purification and caraterization
MCCARTY, D. R., HATTORI, T.,
CARSON, C. B., Vasil, V., Lazar, M.
& Vasil, I. K. (1991) Cell 66, 895–906.
9 - 21
MEINKE, DW (1992) A homeotic mutant
of Arabidopsis thaliana with leafy
cotyledons. Science 258: 1647-1650
MEINKE, D. W., FRANZMANN, L. H.,
Nickle, T. C. & Yeung, E. C. (1994)
Plant Cell 6, 1049–1064.
N. CAPELLI, T. DIOGON, H. GREPPIN,
P. SIMON (1997) Isolation and
characterization of a cDNA clone
encoding an osmotin-like protein from
Arabidopsis thaliana, Gene 191 51–
56.
NAMBARA E, HAYAMA R,
NISHIMURA M, KAwaide H, Kamiya
Y, Naito S (2000) the role of ABI3 and
FUS3 loci in Arabidopsis thaliana on
phase transition from late embryo
development to germination. Dev. Biol.
220: 412-423
OGAS J, CHENG JC Sung ZR Sommerville
C (1997) Cellular differentiation
regulated by gibberellin in the
Arabidopsis thaliana pickle mutant.
Science 227: 91-94
OGAS, J., CHENG, J.-C., SUNG, Z. R. &
Somerville, C. (1997) Science 277, 91–
94
OGAS J, KAUFMANN S, HENDERSON
J, Somerville C (1999) PICKLE is a
CHD3 chromatin-remodelating factor
that regulate the transition from
embryonic to vegetative development
in Arabidopsis. Proc Natl Acad Sci
USA 96: 13839-13844
OGAS, J., KAUFMANN, S., Henderson,
J.&Somerville, C. (1999) Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 96, 13839–13844.
OGAWA M, HANADA A, YAMAUCHI
Y, Kuwahara A, KAmiya Y, Yamagushi
S (2003) Gibberellin biosíntesis and
response during Arabidopsis seed
germination. Plant cell 15: 1591-1604
PARCY F, VALON C, KOHARA A,
Misera S, Giraudat J (1997)The
ABSICIC ACID-INSENSITIVE3,
FUSCA3 and LEAFY
COTYLEDON1 lociact in concert to
control multiple aspects of Arabidopsis
seed development. Plant cell 9: 1265-
1277
R. CHEN, F. WANG, A.G. SMITH (1996)
A flower-specific gene encoding an
osmotin-like protein from
Lycopersicon esculentum, Gene 179 ,
301–302.
Biotempo 2006, Volumen 6,
21
REIDT, W., WOHLFARTH, T.,
Ellerstroem, M., Czihal, A., Tewes, A.,
Ezcurra, I., Rask, L. & Baumlein, H.
(2000) Plant J. 21, 401–408.
RAZ V, BERGERVOET JH, Koornneef M
(2001) Sequencial steps for
developmental arrest in Arabidopsis
seeds. Development 128: 243-252
SASSA H, HIRANO H (1998) Style-
specific and developmentally regulated
accumulation of glycosilated thaumatin/
PR5-like protein in Japanese pear
(Pyrus serotina Rehd.). Planta 205:
514-521
SINGH DP, JERMAKOW AM, Swain SM
(2002) Gibberellins are require for seed
development and pollen tube growth
ins Arabidopsis. Plant cell 14: 3133-
3147
SANDRA BENSMIHEN, SONIA RIPPA,
Guillaume Lambert, Delphine Jublot,
Véronique Pautot, Fabienne Granier,
Jérôme Giraudat, and François Parcy.
(June 2002) The Homologous ABI5 and
EEL Transcription Factors Function
Antagonistically to Fine-Tune Gene
Expression during Late
Embryogenesis. The Plant Cell, Vol. 14,
1391–1403.
Science (1 july 2005) How does a single
somatic cell become a whole plant.
Published by AAAS.
Sharyn E. Perry2, Melissa D. Lehti, and
Donna E. Fernandez (May 1999) The
MADS-Domain Protein AGAMOUS-
Like 15 Accumulates in Embryonic
Tissues with Diverse Origins. Plant
Physiology, Vol. 120, pp. 121–129.
Stone S, Kwong L, Matsudaira Y, Pelletier
J, Lepiniec L, Fisher R, Goldberg R,
Harada JJ (2001) LEAFY
COTYLEDON2 encodes a B3 domain
transcription factor that enduce embryo
development. Plant Biol 98: 11806-
11811
TAKUMA S, MAMORU NISHIMOTO,
WATARU Saburi, Atsuo Kimura,
Hiroshi Yasuda, masahiro Uchibatake,
Takuji Ohwada, Hiroshi Masuda (2004)
Isolation ans Characterization of cDNA
encoding P-19.5 protein accumulated
preferentially at early stage of carrot
somatic embriogénesis. Plant science
167: 1211-1217
TALON M, KOORNEEF M, Zeevart JAD
(1990) Endogenous gibberrelins in
Arabidopsis thaliana and possible steps
blocked in the biosynthetic pathway of
semidwarf ga2 and ga5 mutants. Proc
Natl Acad Sci USA 87: 7983-7987
TAHIRI-ALAOUT A, DUMAS E,
Gianinazzi S (1990) Detection of PR-
protein in tobacco roots infected with
Chalara elegans. Plant Mol. Biol. 14:
869-871
THOMAS SG, PHILLIPS AL, Hedden P
(1999) Molecular cloning and functional
expression of gibberellin 2-oxidases,
multifunctional enzymes involved in
gibberelin deactivation.Proc Natl Acad
Sci USA 96: 4398-4703
TSUCHIYA Y, NAMBARA E, Naito S,
McCourt P(2004) The FUS3
transcripton factor funsctions through
the epidermal regulator TTG1 during
embriogénesis in Arabidospsis. Plant J
37: 73-81
ULMASOV, T., Hagen, G. & Guilfoyle,
T. J. (1997) Science 276, 1865- 1868.
W. HUANG, X. CUI, Y. Tian, M. Lin, X.
Peng (1994) Cloning of T7 lysozyme
gene and construction of the vector for
transgenic plants resistant to bacterial
infection, Wei Sheng Wu Hsueh Pao.
34 261–265.
WEST M, HARADA JJ (1993)
Embriogenesis in higher plants: an
overview. Plant Cell 5: 1361-1369
WEST, M. A. L., Matsudaira Yee, K.,
Danao, J., Zimmerman, J. L., Fischer,
R. L., Goldberg, R. B. & Harada, J.
J. (1994) Plant Cell 6, 1731–1745.
XU Y-L, LI L, Gage D, Zeevaart J (1999)
Feedback regulation of GA5 expression
and metabolic engineering of gibberellin
levels in Arabidopsis. Plant Cell 11: 927-
936
YAMAGUCHI S, KAMIYA Y, Sun T
(2001) Distinct cell-specific expression
patterns of early and late gibberellin
biosynthetic genes during Arabidopsis
seeds. Plant Cell 10: 2115-2126
YASUDA H, NAKAJIMA M, Ito T,
Ohwada T, Masuda H (2000) Partial
caracterization of genes whose
transcripts accumulate preferently in
cell cluster at the earlier stage of carrot
somatic embriogénesis. Plant Mol. Biol.
45: 705-712
9 - 21
