Biotempo 2005, Volumen 5,
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DAS-ELISA EN LA DETECCION DE IgG HUMANA EN MANCHAS DE
SANGRE DE INTERES FORENSE
Alcides Guerra1
Tomás Agurto
Enrique Castillo
RESUMEN
El presente trabajo tuvo por objetivo validar el método DAS-ELISA, como alternativo
al de inmunodifusión usado con frecuencia en Criminalística, para determinar si una mancha
de sangre corresponde a sangre humana o animal. Los resultados nos permiten diferenciar
una mancha de sangre humana con la de un pollo, pescado, carnero y perro.
El valor predictivo positivo de la prueba alcanzó el 98% y un valor predictivo negativo
al 100%.
Palabras Claves: DAS-ELISA, anti IgG humana, especificidad de sangre.
SUMMARY
The present work considered objective to validate the method of the DAS-ELISA, as
alternative inmunodiffusion method used frequently in Criminality, to determine if a spot of
blood corresponds to human or animal blood. The results permit to differentiate a spot of
human blood among chicken, fish, ram and dog.blood. The value to predict positive of the
test reached al 98% and a value to predict negative 100%.
Keywords : DAS-ELISA, anti IgG human, specificity of blood
INTRODUCCIÓN
Cuando se estudia la escena del
crimen, las evidencias más reveladoras que
podemos encontrar son las manchas
sanguíneas. Un adecuado análisis científico
en términos de reconstrucción e
identificación de las mismas, proporciona
datos importantes en el esclarecimiento del
hecho.En el aspecto de identificación para
ser más exacto de identidad biológica,
primero debe verificarse si dicha mancha
corresponde a sangre (se aplicará un
examen de orientación y certeza) para
luego determinar si corresponde a sangre
humana. Sin embargo, en ocasiones, las
muestras no llegan al laboratorio en
condiciones adecuadas en concentración y
preservación, por lo que es necesario
desarrollar un método de mayor sensibilidad
al de inmunodifusión.
El presente trabajo pretende
estandarizar un método INMUNO-
ENZIMÁTICO (EIA) empleando anti-
cuerpos monoclonales dirigidos contra la
inmunoglobulina G humana.
1 Laboratorio de Microbiología e Inmunología, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Ricardo
Palma; aguerra@mail.urp.edu.pe
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MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron muestras de manchas
de sangre humana, pollo, pescado, carnero,
y perro impregnadas en gasa.
Se preparó la muestra recortando
0,5 cm2 de la gasa impregnada con la
mancha de sangre y disuelta en buffer
fosfato pH 6,5; se centrífugo a 3 500 RPM
por 15 minutos para obtener el
sobrenadante.
Se cargó el pocillo, sensibilizado con
Anti IgG humana Monoclonal, con 100
µ
l
del sobrenadante, se incubó a temperatura
ambiente por 2 horas. Se lavó tres veces
con buffer fosfato y se adicionó a cada
pocillo 100
µ
l del conjugado (Anti IgG
humana conjugado con peroxidasa),
incubándose por una hora a temperatura
ambiente. Se volvió a lavar tres veces con
buffer fosfato.
Se le adicionó el sustrato (Agua
oxigenada) y 100
µ
l el cromógeno (TMB
3-metil-2-benzotiazolinona hidrazona) y se
llevó a incubar a 37 °C por 3 minutos.
Se detuvo la reacción adicionando
Acido sulfúrico 2M.
RESULTADOS
Se procesaron 10 muestras de sangre
de pollo, 15 de pescado, 18 de carnero, 09
de perro y 56 de humano y los resultados
del método de DAS-ELISA, se realizaron
visualmente dando positivo el color azul
para sangre humana y color grosella para
sangre de animales; tal como se muestra
en la Tabla 1 y 2.
Tabla 1. Resultados de la
determinación de la IgG humana
Muestra Positivo Negativo
para IgG humana para IgG humana
Pollo 00 10
Pescado 00 15
Carnero 00 18
Perro 00 09
Humano 55 01
Tabla 2 Tabulación de datos
Resultado Sangre Sangre
DAS-ELISA humana no humana
Positivo 55 (A) 00 (C)
Negativo 01 (B) 52 (D)
VP+ = (A/A+B) 100 = 98%
VP- = (D/C+D) 100 = 100%
DISCUSIÓN
De las 52 muestras (entre las de
pollo, pescado, carnero y perro) de sangre
no humana ante la detección de la IgG
humana resultaron negativas. En el caso
de las 56 muestras de sangre humana una
muestra resultó como negativa. Este
resultado puede deberse al método seguido
en la obtención de la muestra. Se
recomienda tomar en cuenta el tiempo de
incubación de la muestra en el pocillo sensi-
bilizado.
CONCLUSIONES
Estos resultados nos permiten
asegurar que el método del DAS-ELISA,
puede utilizarse para reconocer la IgG
humana en manchas de sangre, con poca
cantidad de muestra. El valor predictivo para
la prueba positiva alcanzó el 98% y para la
prueba negativa el 100%.
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