Analysis and proposals to access safe water and reduce hydric vulnerability 61 PAIDEIA XXI PAIDEIA XXI Vol. 14, Nº 1, Lima, january-june 2024, pp. 61-70ISSN Versión Impresa: 2221-7770; ISSN Versión Electrónica: 2519-5700 ORIGINAL ARTICLE / ARTÍCULO ORIGINAL EFFECT OF CHITOSAN EXTRACTED FROM ROMALEON SETOSUM (MOLINA, 1782) (DECAPODA: CANCRIDAE) ON THE GERMINATION AND DEVELOPMENT OF SOLANUM LYCOPERSICUM L. (SOLANALES: SOLANACEAE) SEEDLINGS EFECTO DEL QUITOSANO EXTRAÍDO DE ROMALEON SETOSUM (MOLINA, 1782) (DECAPODA: CANCRIDAE) EN LA GERMINACIÓN Y DESARROLLO DE PLÁNTULAS DE SOLANUM LYCOPERSICUM L. (SOLANALES: SOLANACEAE) Camila de la Cruz–Leytón 1 *; Mey Lam Farfán–Torres 1 ; César Lozano–Lévano 1 & Alejandrina Zavaleta–Rengifo 1 ABSTRACT doi:10.31381/paideiaxxi.v14i1.6260 http://revistas.urp.edu.pe/index.php/Paideia Este artículo es publicado por la revista Paideia XXI de la Escuela de posgrado (EPG), Universidad Ricardo Palma, Lima, Perú. Este es un artículo de acceso abierto, distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Atribución 4.0 Internacional (CC BY 4.0) [https:// creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.es] que permite el uso, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que la obra original sea debidamente citada de su fuente original. Currently, the use of agrochemicals is necessary for the production of foodstuffs of agroindustrial interest such as tomatoes ( Solanum lycopersicum L.). These are applied mainly as growth stimulants for the crop; however, they also bring with them problems that affect the environment and human health, so better alternatives are being sought to reduce their use; given this, chitosan is presented as an option for plant biostimulants. The objective of this research was to study the effect of chitosan extracted from the shell of Romaleon setosum (Molina, 1782) or “hairy crab” on the germination and development of S. lycopersicum seedlings. The extracted chitosan was applied to tomato seeds at concentrations of 1000, 2000, and 3000 mg/l, and germination percentage was evaluated after 10 days and growth indicators every seven days over three weeks. The results showed that the seeds treated with chitosan had a stimulating effect 1 Laboratorio de Biología Aplicada. Empresa NINDECYT. Lima, Perú* Corresponding author: camila.delacruz.leyton@gmail.com Camila de la Cruz-Leytón: https://orcid.org/0000-0003-4955-0639Mey Lam Carmen Farfán-Torres: https://orcid.org/0000-0001-9820-5001César Lozano-Lévano: https://orcid.org/0000-0002-5275-538XAlejandrina Mirella Zavaleta-Rengifo: https://orcid.org/0000-0002-5822-5910
de la Cruz-Leytón et al . 62 PAIDEIA XXI on the indicators of fresh biomass and dry biomass, especially on radicle length, but not on seed germination or stem length. Of the concentrations applied, 1000 mg/L showed the best results in the indicators evaluated. Keywords: biostimulant – growth – degree of deacetylation – tomatoEn la actualidad el uso de agroquímicos es necesario para la producción de alimentos de interés agroindustrial como el tomate ( Solanum lycopersicum L.). Estos se aplican principalmente como estimulantes de crecimiento para el cultivo; sin embargo, también traen consigo problemas que afectan al medio ambiente y la salud humana, por lo que se busca mejores alternativas que permitan la reducción de su uso; ante esto, el quitosano se presenta como una opción de bioestimulante en plantas. El objetivo de este trabajo de investigación fue estudiar el efecto del quitosano extraído del caparazón de Romaleon setosum (Molina, 1782) o “cangrejo peludo” en la germinación y desarrollo de plántulas de S. lycopersicum . El quitosano extraído fue aplicado a las semillas de tomate a concentraciones de 1000, 2000 y 3000 mg/l, y se evaluó el porcentaje de germinación luego de 10 días y los indicadores de crecimiento cada siete días en un periodo de tres semanas. Los resultados mostraron que las semillas tratadas con quitosano presentaron efecto estimulante en los indicadores de biomasa fresca y biomasa seca, y sobre todo en la longitud de radícula, mas no para la germinación de semillas, ni en la longitud de tallo. Mientras que, de las concentraciones aplicadas, fue la de 1000 mg/L la que presentó mejores resultados en los indicadores evaluados. Palabras claves: bioestimulante – crecimiento – grado de desacetilación – tomate RESUMEN
Effect of chitosan extracted from Romaleon setosum on Solanum lycopersicum 63 PAIDEIA XXI INTRODUCCIÓN El quitosano es un biopolímero no tóxico, ni irritante (Boeriu & van den Broek, 2019), que se obtiene por la re-acción de desacetilación de la quitina, el cual se puede extraer del exoesque-leto de artrópodos (Mati-Baouche et al ., 2014; Malerba & Cerana, 2016); siendo los crustáceos, como Romaleon setosum (Molina, 1782) conocido como cangrejo peludo, los de más fácil ob-tención y menor costo (Shahrajabian et al ., 2021).Las aplicaciones del quitosano se presentan en diversos campos, como la industria agrícola (bioestimulante y fungicidas), en la medicina (cicatrización de heridas, producción de suturas y cremas bactericidas) y en la industria cosmética (bactericida en jabones y champús, hidratante para la piel y pasta dental) (Romero & Pereira, 2020). Por su actividad bioestimuladora comprobada en varias plantas, relacionadas con la producción de metabolitos secundarios, reguladores del crecimiento y agentes antiestrés (Hidangmayum et al. , 2019; Stasińska & Hawrylak , 2022), puede ser utilizado para reemplazar el uso de los agroquímicos (fertilizantes y fungicidas químicos), que actualmente se aplican en grandes cantidades en los cultivos y generan un impacto negativo sobre el medio ambiente (Veobides et al ., 2018; Shahrajabian et al. , 2021).Basándose en lo descrito anterior-mente, se resalta la importancia de estudiar el efecto bioestimulante del quitosano en plantas interés mun-dial como por ejemplo el tomate Sola-num lycopersicum L., debido a que los principios activos que contienen los bioestimulantes actúan en ella e in - crementan su desarrollo mejorando la productividad y calidad del fruto, así como también fortaleciendo la resis - tencia a enfermedades (Lárez-Velás - quez et al., 2019); así mismo el tomate, viene siendo la hortaliza más consumi - da en el mercado global después de la papa (MINAM, 2020), con una produc - ción mundial que para el año 2019, que bordea los 180.766 millones de t (Reyes-Pérez et al ., 2020; Mejía, 2022), la cual demanda mecanismos que ga - ranticen su producción reduciendo los efectos negativos propios de los quími - cos y que sean saludables para el con - sumidor (CEDRSSA, 2020). Esta investigación tuvo como objetivo evaluar y comparar el efecto bioestimulante del quitosano a diferentes concentraciones, extraído de los caparazones de R. setosum, en la germinación y desarrollo de plántulas de S. lycopersicum , con esto evaluó el indicador de germinación y los indicadores de crecimiento (longitud de tallo y radícula, biomasa fresca y seca). MATERIALES Y MÉTODOS El trabajo de investigación se realizó en las instalaciones del Laboratorio de Biología Aplicada de la Empresa Nindecyt, Los Olivos, Lima (11°58’53”S 77°04’04”W), entre los meses de mayo y octubre del 2022; tuvo como población un paquete de aproximadamente 1000 semillas de S. lycopersicum de la marca “A&S”, y se tomó como muestra 180 semillas
de la Cruz-Leytón et al . 64 PAIDEIA XXI para la prueba experimental. Por otra parte, los caparazones de R. setosum (22 unidades) que fueron utilizados para la obtención del quitosano, se adquirieron del Mercado Mayorista Pesquero del Callao, Perú. Obtención del quitosano Se realizó en base a las cinco etapas descritas por Bonfante et al . (2018). Se inició con la limpieza de los caparazones adquiridos, secado (90°C por 5 h), molido y cernido. Luego se procedió con el proceso de despigmentación, para la cual se mezcló alcohol al 85 % con la muestra cernida, seguido de la desmineralización, en la que se mezcló HCl a concentración de 1,5M con la muestra despigmentada (1:10), a una velocidad de mezcla con el agitador a 500 rpm por 3 horas a temperatura ambiente. La siguiente etapa fue la despro-teinización, en la que se mezcló NaOH a 1M y la muestra desmineralizada (1:10), a 500 rpm por 2 h (80°C). Final-mente, la desacetilación, para la cual se mezcló NaOH al 50 % y la muestra desproteinizada (1:10), a 500 rpm por 3 h (100°C), luego se fltró al vacío con una bomba, se lavó hasta registrar un pH de 7, se volvió a fltrar y se secó utilizando la estufa a 65°C por 6 h. Caracterización del quitosano La muestra desacetilada se caracterizó bajo el procedimiento de titulación potenciométrica de Plúas & Véliz (2018), para lo cual se tituló 25 mL de una solución de quitosano y HCl 0,3N al 1 % p/v con NaOH a 0,1N, y luego se midió el pH de la solución por cada 2 mL de agente titulante agregado hasta observar la formación de agregados gelatinosos. Los datos obtenidos se tabularon y grafcaron, comparando la primera derivada de pH/v vs. cantidad de NaOH añadido, para obtener dos puntos de infexión y con ello aplicar la siguiente relación matemática para el cálculo del grado de desacetilación: donde, “x” es el primer punto de infexión (ml), “y” es el segundo punto de infexión (mL), “N” es la normalidad de NaOH y “m” es peso utilizado del quitosano (g). Aplicación del quitosano Las semillas se desinfectaron con agua agregando 10% de hipoclorito de sodio del volumen total, por 30 min. Luego se sumergieron en tres soluciones diferentes de quitosano (1000, 2000 y 3000 mg/l) y una solución control (agua) por 4 h (García, 2019). Después, se colocaron las semillas en placas Petri con papel fltro humedecido con agua destilada por 10 días, para con ello obtener el primer indicador a evaluar, el porcentaje de semillas germinadas. Las semillas germinadas fueron plantadas en vasos descartables de 10 onzas con sustrato preparado, de estas se escogieron al azar 15 plántulas por concentración aplicada para ser evaluadas en 3 repeticiones con 5 plántulas cada una, incluyendo el control, en un período de 3 semanas, donde semanalmente se monitorearon = 16 . 1 ( ) ( ) ;
Effect of chitosan extracted from Romaleon setosum on Solanum lycopersicum 65 PAIDEIA XXI los indicadores relacionados al crecimiento. Estos indicadores incluían la longitud del tallo (medida desde la base del tallo hasta la parte apical), la longitud de radícula (medida desde la base del tallo hasta la parte fnal de la raíz principal) y la biomasa fresca y seca (el peso vegetal antes y después del secado en estufa a 80°C con intervalos cada 10 minutos). Además, se registraron los parámetros ambientales de temperatura (ºC) y humedad relativa (%). Los datos obtenidos se grafcaron y compararon utilizando el programa de Microsoft Excel vs 2016, mientras que para evaluar las diferencias signifcativas entre los tratamientos y el grupo control se utilizó la prueba ANOVA y prueba TUKEY mediante el programa IBM SPSS Statistics vs25. Aspectos éticos Los resultados del presente trabajo siguieron aspectos éticos que contribuyen de forma positiva al conocimiento científco y al buen uso del ecosistema a través de las BPL-Buenas Prácticas de Laboratorio, RESULTADOS Y DISCUSIÓN En los resultados con la caracterización del quitosano en grado de desacetilación se obtuvo un valor de 77,28 ± 1,56 %. Esto difere del quitosano comercial disponible que presenta normalmente un grado de desacetilación >85% (Zerpa et al ., 2017). Diversos estudios han demostrado que estas variaciones en el grado de desacetilación juegan un papel muy importante en la disminución o aumento del efecto bactericida, fungicida, así como de su efecto regulador de la germinación de semillas, del crecimiento, vigor de las plantas y el rendimiento agrícola (Colina et al., 2014). Porcentaje de germinación Luego de los 10 días, se observó que la concentración de 1000 mg/L tuvo un mayor porcentaje de semillas germinadas (88,9 %) en comparación el resto, además, el grupo control tuvo el 100% de germinación. Este resultado es semejante a lo observado por Enríquez-Acosta & Reyes-Pérez (2018) donde al aplicar esta misma concentración a las semillas de S. lycopersicum pero del producto Quitomax ® (un producto químico a base de quitosano), a base de quitosano, obtuvieron el mayor número de semillas germinadas en cada día de evaluación (7 días en total); sin embargo, en todos sus tratamientos registraron valores mayores al control, a diferencia de lo observado en presente trabajo donde después de los 10 días del experimento los porcentajes del grupo experimental fueron menores al control. Longitud de tallo Se observó que la concentración de 1000 mg/L de quitosano presentó mejores resultados en la semana 1 y 3 de evaluación (49,71 mm y 67,04 mm respectivamente) y la concentración de 2000 mg/l en la semana 2 (61.29 mm). Sin embargo, todas estas longitudes fueron menores a las que presentó el grupo control, como se
de la Cruz-Leytón et al . 66 PAIDEIA XXI observa en la fgura 3A. Por su parte los trabajos de Gustavo-González et al. (2021) y Enríquez-Acosta & Reyes-Pérez (2018) presentaron resultados semejantes utilizando Quitomax ® a la concentración de 1g /l (1000mg/l) frente al control. En este caso, los valores del grupo experimental no superaron a los obtenidos en el grupo control, por lo que no se presenta un efecto estimulante para las concentraciones aplicadas, siendo esto comprobado con la signifcancia obtenida de las pruebas estadísticas realizadas. Longitud de radícula En la evaluación de la longitud de la radícula se observó que en la semana 1 y 3 se obtuvo un mejor resultado para la concentración de quitosano a 3000 mg/l (50,91 mm y 46,88 mm respectivamente) y para la semana 2 el mejor valor se obtuvo a la concentración de 1000 mg/l (47,37 mm), siendo estas dos concentraciones las más favorables de los tratamientos junto con el control (Ver fgura 2B). Esto es semejante a lo obtenido por Enríquez-Acosta & Reyes-Pérez (2018) que trabajo en S. lycopersicum a tres concentraciones diferentes, siendo la concentración de 1000mg/l la que tuvo mejores resultados; además, para el presente trabajo los resultados de las diferentes concentraciones aplicadas para este indicador superaron, aunque no signifcativamente, a los del grupo control. Biomasa fresca Se observó que en la semana 1 las concentraciones de 1000 mg/L y 2000 mg/L (24,3 mg y 23,6 mg, respectivamente), y en la semana 2 y 3 la concentración de 2000 mg/L (27,5 mg y 32,2 mg, respectivamente), dieron buenos resultados (fgura 2C). Estos resultados se asemejan a los obtenidos en el trabajo de García (2019), el cual a los 15 días de la siembra de las plántulas de S. lycopersicum presentó mejores valores para la concentración de 2 g/L (2000 mg/L) con un promedio de 7,15 g, aunque para el presente caso los resultados no fueron estadísticamente signifcativos. Biomasa seca Para la evaluación del peso, en la semana 2, la concentración de 1000 mg/L (16,1 mg) dio el mejor resultado; y al compararlo con el control la mayoría de las evaluaciones tuvieron valores más altos, tal como se observa en la fgura 2D, siendo estadísticamente no signifcativo, esto guarda relación con los resultados de los indicadores ya evaluados de crecimiento, ello se basa en que el peso seco es proporcional al crecimiento de la planta, pues nos permite determinar el carbono fotoasimilado que pasara a formar parte de su estructura (Di Benedetto & Tognetti, 2016).
Effect of chitosan extracted from Romaleon setosum on Solanum lycopersicum 67 PAIDEIA XXI Tabla 1. Tabla de indicadores de crecimiento y desarrollo de Solanum lycopersicum para cada concentración de quitosano aplicado y control. CONTROL1000 mg/L2000 mg/L3000 mg/L Germinación de semillas10088,986,782,2Longitud del tallo68,8167,0462,9753,36Longitud de la radícula38,1240,3245,3746,88Biomasa fresca0,01070,01190,01150,0102Biomasa seca0,0310,0300,0320,022 Al realizar la prueba de ANOVA y la prueba TUKEY solo se observó diferencias signifcativas ( P < 0,05) de los grupos experimentales respecto al control para el indicador de longitud del tallo, en la semana 1 para las tres concentraciones (0,018, 0,009 y 0,001 respectivamente) y en la semana 3 para concentración de 3000 mg/L (0,003); y el indicador de biomasa fresca, en la semana 3 para la concentración de 3000 mg/L (0,01).Finalmente, en la medición de los parámetros, la temperatura promedio fue de 20,9 °C y la humedad relativa promedio fue de 60,4%. Los resultados de la germinación y desarrollo en S. lycopersicum se debería a la acción del quitosano como estimulador del metabolismo vegetal, esto dado por receptores de naturaleza proteica que se encuentran en las células vegetales, que se unirían al biopolímero y activarían diversas reacciones de tipo celular, fujo de iones, despolarización de membranas y la síntesis de enzimas como fenilalanina amonio liasa (PAL), proteasas, quitinasas y celulasas (González et al ., 2014). Otros autores sugieren que el quitosano también puede inducir una señal para la síntesis de ftohormonas como las giberelinas y las auxinas para mejorar el crecimiento y desarrollo de la planta (Mukhtar et al ., 2020).Se concluye que el quitosano extraído a partir del caparazón de R. setosum presentó un grado de desacetilación de 77,28 ± 1,56 %. La aplicación del quitosano obtenido en S. lycopersicum presentó un efecto bioestimulante, frente al control, para los indicadores de longitud de radícula, biomasa fresca y biomasa seca, más no para la germinación de semillas ni para el indicador de longitud de tallo. La concentración de 1000 mg/L de quitosano presentó los mejores resultados sobre los indicadores evaluados, sobre todo para biomasa seca y longitud de radícula. El indicador de longitud de radícula presentó el mayor efecto bioestimulante para sus tres concentraciones aplicadas, siendo las de mejores resultados la de 1000 mg/L y 3000 mg/L.
de la Cruz-Leytón et al . 68 PAIDEIA XXI Author contributions: CRediT (Contributor Roles Taxonomy)CCL = Camila de la Cruz Leytón MFT = Mey Farfán Torres CLL = César Lozano Lévano AZR = Alejandrina Zavaleta Rengifo Conceptualization : CCL, MFT, AZR Data curation : CCL, CLL Formal Analysis : CCL, CLL Funding acquisition : CLL Investigation : CCL, MFT, AZR Methodology : CCL, MFT, AZR Project administration : CLL, CCL Resources : CLL, MFT Software : CLL, MFT Supervision : CLL, CCL Validation : CLL, CCL, AZR Visualization : CCL, CLL, AZR, MFT Writing – original draft : AZR, CCL. CLL Writing – review & editing : CCL, AZR REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Boeriu, C., & van den Broek, L (2019). Chemical and enzymatic modifcation of chitosan to produce new functional materials with improved properties [Modifcación química y enzimática del quitosano para producir nuevos materiales funcionales con mejores propiedades]. Chitin and Chitosan: Properties and Applications (pp. 245-258). John Wiley & Sons Ltd. Bonfante, H., Ávila, G., Herrera, A., Torrenegra, M., & Gonzáles, A. (2018). Evaluation of fve chitosan production routes with astaxanthin recovery from shrimp exoskeletons. Chemical Engineering Transactions , 70, 1969-1974. Centro de Estudios para el Desarrollo Rural Sustentable y la Soberanía Ali mentaria [CEDRSSA]. (2020). Análisis de la producción y consumo de hortalizas. http://www.cedrssa.gob.mx/post_n-annolisis_-n-_de_la__-n-produccinin_-n-_y__-n-consumo_-n-_de__-n-hortalizas_-n.htm#home Colina, M., Ayala, A. Rincón, D., Molina, J., Medina, J., Ynciarte, R., Vargas, J., & Montilla, B. (2014). Evaluación de los procesos para la obtención química de quitina y Quitosano a partir de los desechos de cangrejos. Revista Iberoamericana de Polímeros y Materiales , 15 , 21-43.Di Benedetto, A., & Tognetti, J. (2016). Técnicas de análisis de crecimiento de plantas: su aplicación a cultivos intensivos. Revista de investigaciones agropecuarias , 42 , 258-282.Enríquez-Acosta, E., & Reyes-Pérez, J. (2018). Evaluación de quitomax® en la emergencia, crecimiento y nutrientes de plántulas de tomate ( Solanum lycopersicum L.). Ciencia y Tecnología, 11 , 31-37.
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